Моторная лодка Обь, характеристики и особенности

В СССР производилось немало моторных лодок, но туристам и рыбакам больше всего полюбилась «Обь». Ее начали производить в 60-х годах, прототипом послужила пластиковая лодка ПК-5. Но «Обь» производилась из дюралюминия.

Выпускам модели занимался новосибирский завод ЗиЧ и предприятие ГАЗИСО в г. Горький. Модели двух заводов отличались – «Обь» производства ЗиЧ выпускалась с более плавным и пологим форштевнем и с более удачными обводами, по мнению многих покупателей.

Эти лодки были популярны, пользуются они популярностью и сегодня. Более того, несколько модернизированные Обь-1 и Обь-4 производятся в наше время частными предприятиями.

Всего за историю лодки было разработано ее несколько модификаций – Обь-1, 2, 3, 4, 5 и Обь-М. В зависимости от типа, технические характеристики лодок менялись, но были и схожие черты – глиссирующий корпус, остроскулая форма, закрученное днище (сужающееся возле кормы и высоко поднятое возле транца). К общим чертам относится лобовое стекло особой формы, герметичный отсек для вещей в носовой части, пассажирские сидения в кокпите. Все моторки производились по клепаной технологии, из листов дюралюминия толщиной от 1,5 до 2 мм, с тиоколовыми лентами для герметизации швов.

Обь-1 и Обь-2

Первая модель, завоевавшая большую популярность, благодаря своим техническим и ходовым характеристикам. На нее можно установить мотор мощностью до 30 л.с., вместительность модели – до 4 человек (есть два двухместных сидения). Лодка развивает скорость до 40 км/ч (при мощности двигателя 20 л.с.). Для большей устойчивости предусмотрены бортовые були, длина которых составляет 2,5 м.

Особенности модели Обь-1 и Обь-2:

длина – 4,2 м;

максимальная ширина – 1,45 м;

высота борта в миделе – 0,55 м;

полный вес – 140 кг;

грузоподъемность – до 400 кг.

Что касается второй модели лодки, то ее технические характеристики практически не изменились, и она выпускалась в ограниченном количестве, недолгое время. Изменениям подверглась внутренняя отделка лодки, в сторону большего комфорта. Так, в лодке установлены мягкие сидения, есть тахометр и встроенная помпа, рулевая колонка редукторного типа. Для безопасного хождения в темное время суток встроены габаритные фары. В комплектации шел тент, который можно использовать и в движении. Производитель усилил транец, за счет чего на Обь-2 можно установить мотор мощностью до 40 л.с. Есть АКБ.

Обь-3

Эта модель существенно отличается от первых двух. Ее модифицировали, ориентируясь на отзывы рыбаков и туристов. В результате модификации лодка получила следующие характеристики:

длина увеличилась до 4,3 м;

максимальная ширина – до 1,56 м;

высота борта осталась прежней, 0,55 м;

увеличился вес до 185 кг.

Максимальная грузоподъемность, вместительность и мощность мотора не изменились. Но вместо дюралюминия Д1 стал использоваться сплав Д16, который обеспечивал большую прочность бортам.

Обь-4

Если предыдущие три модели разрабатывались заводом ЗиЧ, то Обь-4 создали на заводе «Алмаз», тоже в Новосибирске. От предыдущих модификаций лодку отличает высокая грузоподъемность и максимальная скорость, габариты. В народе модель прозвали «Сибирский богатырь», и она полностью оправдывает такое название.

Технические характеристики Обь-4:

длина – 7,2 м;

максимальная ширина – 2 м;

максимальная высота борта – 0,82 м;

вес при полной комплектации – 600 кг;

максимальная грузоподъемность – до 1500 кг;

пассажирская вместимость – до 6 человек;

скорость – до 50 км/ч;

мощность мотора – до 130 л.с.

Благодаря таким характеристикам Обь-4 может использоваться не только на реках, озерах, но и в море. Лодка показывает хорошие ходовые качества даже при волне высотой 1,2 м.

Обь-5

Довольно «молодая» модель, ее выпуск начался в 2000 году. Разработчик и производитель – все тот же новосибирский «Алмаз». Лодка имеет меньше габариты, чем у четвертой модификации, во многом она напоминает Обь-3. Но есть и особенности – передние тримаранные обводы, которые ближе к корме принимают форму «крыло чайки», минимальная килеватость, носовые спонсоны, за счет которых хорошо глушится удары волн. Также, в отличие от третьей модели, лодка вмещает большее количество пассажиров, за счет увеличения габаритов. Таким образом, Обь-5 можно считать гибридом третьей и четвертой модели.

Характеристики лодки следующие Обь-5:

длина – 5,6 м;

максимальная ширина – 1,56 м;

максимальная высота борта – 0,78 м;

вес при полной комплектации – 500 кг;

пассажирская вместимость – до 6 человек;

максимальная скорость – 60 км/ч;

мощность двигателя – до 55 л.с.

За счет характеристик модель Обь-5 может использоваться не только на реках или озерах, но и в море, при соблюдении дистанции в 550 км.

Обь-М

Данную модель стали выпускать взамен Обь-1. Производитель изменил корпус лодки, убрав були, но добавив вторую скулу, увеличив килеватость носовой части. Эти изменения позволили снизить силу ударов волн, но вместе с этим снизились и мореходные качества модели, поэтому Обь-М выпускалась недолго – производитель перешел на выпуск лодки Обь-3.

Технические характеристики Обь-М:

длина – 4,24 м;

максимальная ширина – 1,52 м;

максимальная высота борта – 0,61 м;

вес при полной комплектации – 170 кг;

пассажирская вместимость – до 4 человек;

грузоподъемность – до 400 кг;

мощность мотора – до 30 л.с.;

максимальная скорость – до 36 км/ч.

​​​​​​​

На лодке Обь-М разрешено ходить в максимальном удалении от берега до 3 км, при волнении до 3 баллов.

Обь сегодня

Несмотря на то, что массовое производство лодок уже давно прекращено, они активно эксплуатируются рыбаками и охотниками. Современные технологии позволяют сделать каждую модель более комфортной – за счет установки новых лобовых стекол, более современных моторов, дополнения комплектации тентами или мягкими сидениями. При хорошем тюнинге Обь не уступает современным моделям – это уже не раз доказано на практике. При этом стоимость самой лодки не такая и высокая, как и цена ее ремонта или усовершенствования.

технические характеристики и фото катера

Производство моторной лодки «Обь» было начато во времена Советского Союза. Хорошо сбалансированные технические характеристики, неприхотливость в эксплуатации, облегченный корпус и отличные мореходные свойства сделали ее весьма популярной среди почитателей водно-моторного спорта. Продуманная конструкция кокпита позволяет  располагаться на борту судна 4-м человекам, возможность установки тента сделает комфортным использование лодки «Обь» при любых погодных условиях.

Мотолодка “Обь”

Прототипом для создания лодки «Обь» послужила пластмассовая мотолодка «ПК-5», проект которой был опубликован в сборнике «Катера и яхты», № 2, 1964 г

Прототипом для создания лодки «Обь» послужила пластмассовая мотолодка «ПК-5», проект которой был опубликован в сборнике «Катера и яхты», № 2, 1964 г. Благодаря отличным ходовым качествам и мореходности «Обь» быстро завоевала популярность среди любителей водно-моторного спорта и туризма в нашей стране. Она широко используется для дальних спортивных плаваний, соревнований, в качестве прогулочной и рыболовной лодки. Она отличается неприхотливостью в эксплуатации и сравнительно небольшой массой, облегчающей ее хранение на берегу.

«Обь» имеет остроскулыи плиссирующий корпус с днищем «закрученного» типа с сужением кормы у транца и высоко поднятой скулой в носу. Важными элементами, повышающими остойчивость и мореходность лодки, являются бортовые наделки-були длиной по 2,5 м. Вместе с носовым герметичным отсеком они обеспечивают непотопляемость лодки. Общий объем булей — 65 л, носового отсека — 200 л.

Корпус мотолодки “Обь”

В кокпите размером 2,1х1,15 м расположены два двухместных мягких сиденья. В носовом отсеке имеется небольшой багажник. Для осмотра герметичного форпика в палубе предусмотрен лючок с герметичной крышкой, закрепляемой на винтах. Кокпит спереди защищен гнутым ветровым стеклом. У транца оборудована подмоторная ниша.

Корпус лодки клепаной конструкции изготовлен из листов дюралюминия Д16 толщиной 1,5~2 мм, герметичность швов обеспечивается прокладкой тиоколовой ленты.

Лодка поставлялась в торговую сеть без тента и с минимальным снабжением. В производство этой модели было прекращено в связи с переходом на выпуск мотолодки «Обь-М».

Мотолодки “Обь”, “Обь-М”, “Обь-3”: сравнение

Опыт эксплуатации лодки “Обь” в морских условиях

Двое моих соседей по стоянке одновременно эксплуатировали лодки “Обь” и “Обь-М” в заливе Петра Великого. Будучи друзьями, они совершали совместные плавания, что позволяло непосредственно сравнивать эксплуатационные качества судов. Сначала одним из них была приобретена подержанная “Обь”. Требования, которые он предъявлял к судну, были таковы: лёгкое, экономичное, безопасное. Перед покупкой он испытал лодку на метровой волне под “Вихрем-М”.

Несмотря на все усилия, ему не удалось опрокинуть лодку или зарыться в волну. Конечно, из-за отсутствия брызгоотбойников и плоского в корме днища, “Обь” забрызгивалась и испытывала сильные удары, но он счёл это неизбежным злом и приобрёл лодку. В дальнейшем, эксплуатируя “Обь”, он не раз убеждался в её прекрасной всхожести на волну и динамической остойчивости.

Лодка уверенно преодолевала попутную и косую волну, испытывая сильные удары лишь при ходе прямо против ветра и волны. Однако всегда оставалась возможность несколько изменить неблагоприятный курс и снизить скорость, чтобы избежать сильных ударов. Для борьбы с забрызгиванием он несколько увеличил размеры ветрового стекла и сделал съёмные боковины из прорезиненной ткани для защиты от брызг.
Его товарищ захотел приобрести такую же лодку, однако “Обь” уже была снята с производства, подержанную лодку найти не удалось, и ему пришлось покупать

“Обь-М” получилась гораздо менее мореходной, чем старая “Обь”

“Обь-М”. По сравнению со старой “Обью”, в новой лодке было удобнее размещать туристское снаряжение, однако при первых же выходах в море выяснилось, что “Обь-М” зарывается в попутную волну. Рассматривая теоретические чертежи обеих лодок, трудно понять, чем же вызваны такие изменения в мореходности. Однако факт остаётся фактом: “Обь-М” получилась гораздо менее мореходной, чем старая “Обь”.

Неоднократно, совершая совместные путешествия, друзья убеждались, что старая “Обь” легко всходит на волну, в то время как “Обь-М” уже принимает воду на палубу. На тихой воде ходовые качества “Оби-М” под “Вихрём-30” соответствовали ходовым качествам “Оби” под 25-сильным “Вихрем-М”, на волнении же водитель “Оби-М” отставал, так как не мог выдерживать курс и был вынужден постоянно работать “баранкой”, чтобы не зарыться в волну.

Хозяин “Оби-М” даже был вынужден крепить к носу лодки специально сделанный лопатообразный фальшборт, но и он помогал слабо.

Хозяин старой “Оби” жалел, что на момент покупки лодки в ещё не было возможности купить “Привет-22”, с которым “Обь” показала бы ещё лучшие экономические характеристики.

Опыт других водномоторников также показал, что “Обь-М” – неудачная лодка. К тому же при длительной эксплуатации выяснилось, что планширь и продольный набор “Оби-М” из дюралевого уголка оказались подверженными сильной коррозии (старая “Обь” практически не корродировала). Заводу следовало бы оставить неизменными обводы старой “Оби” и обновить внутреннюю планировку, сделать более удобными сиденья и рундуки, заменить воздушные отсеки плавучести пенопластом, и т.д. Неудача заставила проектировать новую лодку. Так родилась “Обь-3”.

Тюнинг моторной лодки «Обь-1»: советы владельца

Создать универсальную лодку, одинаково приспособленную и для прогулок и для дальних туристских путешествий, практически невозможно, тем не менее, каждый владелец любой лодки стремится к этому. Я также попытался повысить комфортабельность своей моторной лодки «Обь» (описание мотолодки «Обь» можно посмотреть на этой странице), проведя небольшую модернизацию (или, как принято говорить сегодня, — тюнинг), но при этом поставил перед собой задачу — обойтись без каких-либо, хотя бы незначительных изменений ее конструкции.

Прежде всего, я задумался над проблемой использования носового герметичного отсека в качестве грузового, разумеется, при сохранении его прямого предназначения — обеспечения непотопляемости лодки.

После долгих поисков был найден довольно простой вариант, отвечающий этому требованию и не требующий каких-либо дополнительных работ на корпусе лодки.

Для горловины отсека я изготовил крышку на резьбе, она устанавливается на ту же самую прокладку и крепится при помощи тех же винтов, что и заводская. Снабдил ее внутренним замком, для защиты отсека от проникновения воды через замочную скважину поставил на нее резьбовую пробку. Замок подойдет любой. Принцип запирания заключается в том, что закрепленный на горловине упор любой конструкции, при закрытом замке не позволит отвернуть крышку.

Подобная конструкция может быть использована и на других дюралевых лодках. Детали горловины можно выточить из листа стали толщиной 14 мм.

Конструкция горловины:
1 — горловина; 2 — крышка; 3 — прокладка резиновая Ø272х4;
4 — винт М4х15, 16 шт.; 5 — упор; 6 — наварыш; 7 — пробка;
8 — прокладка; 9 — замок.

Два 50-миллиметровых штыря в нижней части крышки при закрывании заходят за днищевой шпангоут и тем самым не позволяют ей смещаться внутрь кокпита; в вертикальной плоскости перемещение крышки ограничено замками. Запирание крышки осуществляется при помощи эксцентриковых замков (таких же, как у носового багажника), а на стоянке дополнительно еще и внутренними замками.

Чтобы можно было хранить топливные баки (а в некоторых случаях и мотор) постоянно в лодке, я изолировал отсек под кормовым рецессом от кокпита при помощи быстросъемной крышки. Все детали изготовлены из дюралевого листа толщиной 1,5 миллиметра. Вся работа сводится к тому, что нужно в комингсе кокпита и в рамном шпангоуте проделать дрелью отверстия под винты и удалить угольники, на которых крепится кормовое сиденье.

Крышку этого отсека можно использовать и в качестве стола, для этого сделаны специальные крючки. На выгородке моторного отсека можно сидеть, если появится необходимость управлять мотором при помощи румпеля.Переоборудованный таким образом закрытый отсек вмещает в себя два стандартных топливных бачка, 20-литровую канистру, бачок, объемом 5 литров для масла и другие вещи. Также можно в нем разместить и мотор «Вихрь».

Сделано новое сиденье из сосновой доски толщиной 35 мм; оно короче заводского на 60 мм, теперь при ночевке его можно размещать в изголовье в носовой части кокпита. Спинку я взял от кормового сиденья, которым не пользуюсь.

Дело в том, что четверым выходить на мотолодке «Обь» в походы с ночевкой нецелесообразно: расположиться в кокпите на ночь можно только втроем. А на ходу на носовом сиденье свободно размещаются три человека; сплошная спинка в данном случае как раз к месту.

В передней части сиденья с обоих концов сделаны две выемки, которые предотвращают боковое смещение и позволяют устанавливать его на старое место без переделки угольников.

Для хранения мелких предметов по бортам лодки сделаны полочки и закрытые ящики.

Источники:

• http://www.motolodka.ru/ob.htm
• http://www.vodnyimir.ru/tiuning-modernizatciia-motornoi-lodki-ob.html
• http://www.vodkomotornik.ru/catalog/water-transport/katera-s-zheskim-korpusom/ob-motornaya-lodka.html

Тюнинг катеров в Конаково и Москве

Подробная ошибка IIS 10.0 — 404.11

Ошибка HTTP 404.11 — не найдено

Модуль фильтрации запросов настроен на отклонение запроса, содержащего двойную escape-последовательность.

Наиболее вероятные причины:

• Запрос содержал двойную escape-последовательность, а фильтрация запросов настроена на веб-сервере, чтобы отклонять двойные escape-последовательности.

Что можно попробовать:

• Проверьте конфигурацию / систему.webServer / security / requestFiltering @ allowDoubleEscaping в файле applicationhost.config или web.confg.

Подробная информация об ошибке:

Дополнительная информация:

Это функция безопасности.Не изменяйте эту функцию, пока не полностью осознаете масштаб изменения. Перед изменением этого значения необходимо выполнить трассировку сети, чтобы убедиться, что запрос не является вредоносным. Если сервер разрешает двойные escape-последовательности, измените параметр configuration/system.webServer/security/requestFiltering@allowDoubleEscaping. Это могло быть вызвано неправильным URL-адресом, отправленным на сервер злоумышленником.

Просмотр дополнительной информации »

StroboStomp HD | Строб-тюнеры Peterson

JMH

Джими Хендрикс (E Flat Standard) — D # 2, G # 2, C # 3, F # 3, A # 3, D # 4

IOM

Тони Айомми (стандарт C #) — C # 2, F # 2, B2, E3, G # 3, C # 4

MAH

Головка машины (Alt Drop B) — B1, F # 2, B2, E3, G # 3, B3

JPP

Джимми Пейдж (C6) — C2, A2, C3, G3, C4, E4

NYT

Нил Янг (Double Drop D) — D2, A2, D3, G3, B3, D4

KRG

Кит Ричардс (Open G) — D2, G2, D3, G3, B3, D4

SKA

Slipknot (Drop A) — A1, E2, A2, D3, F # 3, B3

JNI

Джони Митчелл (Open D) — D2, A2, D3, F # 3, A3, D4

JWd

Джонни Винтер (стандарт D) D2, G2, C3, F3, A3, D4

SBJ

Джеймс Тейлор (Стандарт со смещениями) — E2, A2, D3, G3, B3, E4

BKT

Curtis Mayfield (настройка черного ключа) — F # 2, A # 2, C # 3, F # 3, A # 3, F # 4

NST

Роберт Фрипп (New Standard Tuning) C2, G2, D3, A3, E4, G4

NdC

Ник Дрейк (Open Cadd4) — C2, G2, C3, F3, C4, E4

AKT

Альберт Кинг — C2, B2, E3, F # 3, B3, E4

МАР

Джонни Марр (F # Standard — Capo +2) — F # 2, B2, E3, A3, C # 4, F # 4

d50

Даймбэг Даррелл (стандарт D -50 центов) — D2, G2, C3, F3, A3, D4

I-A

Маттиас ‘IA’ Эклунд (C # sus4) — C # 2, G # 2, C # 3, F # 3, G # 3, C # 4

SJd

Skip James (Open D Minor) — D2, A2, D3, F3, A3, D4

KKS

Slayer (E Flat Standard) — D # 2, G # 2, C # 3, F # 3, A # 3, D # 4

MST

Мастодонт — A1, G2, C3, F3, A3, D4

COB

Children of Bodom (Drop C) — C2, G2, C3, F3, A3, D4

AAB

Йохан Содерберг — Амон Амарт (стандарт B) — B1, E2, A2, D3, F # 3, B3

Синергия между захватом рецептора / антигена B-клетками и редактированием пептида MHCII зависит от настройки HLA-DO

Линии B-клеток человека

Клетки T2 представляют собой гибриды TxB человека с дефицитом класса II, которые не экспрессируют ни MHCII, ни белки DM / DO ⁵⁶ .Стабильные трансфектанты на основе T2, использованные в этом исследовании, включали T2DR4, T2DR4DM ⁵⁷ (обе клеточные линии были подарены доктором Лизой Дензин, Институт рака Рутгерса, Нью-Джерси) и клетки T2DR4DMDO ¹² (сконструированы лабораторией Меллинса). Эти клетки культивировали в полной модифицированной среде Дульбекко Искова (IMDM) с GlutaMAX и 10% инактивированной нагреванием фетальной телячьей сывороткой (FBS, Thermo Fisher Scientific). Экспрессия DR4, DM или DO в каждой клеточной линии поддерживалась на оптимальном уровне при выборе подходящих антибиотиков, как описано ранее ¹² .Клетки DP представляют собой иммортализованные клоны В-клеток человека, иммортализованные вирусом Эпштейна-Барра (EBV), которые секретируют аутоантитела против GAD65: DPA или DPD ^40,58 (предоставлены доктором Анн-Мари Мадек, INSERM U1060, Faculté de médecine Lyon-Sud. , Oullins Cedex, Франция). Линии DP культивировали в полном IMDM с добавкой среды OPI (Millipore Sigma). Все культуры клеток в этом исследовании поддерживали в инкубаторе 37 ° C, в который постоянно подавали 5% CO2.

Выделение В-клеток миндалин человека

Деидентифицированные ткани миндалин были получены в соответствии с протоколом, одобренным Стэнфордским институциональным наблюдательным советом (IRB № 38079).Ткани миндалин, которые были удалены при тонзиллэктомии, измельчали ​​на небольшие кусочки образца. Эти образцы промывали средой RPMI 1640 (без добавок, Thermo Fisher Scientific) и пропускали через фильтр для клеток из нержавеющей стали 70 мкм (BD Falcon) с использованием стеклянного поршня для создания суспензии отдельных клеток в центрифужных пробирках на 50 мл. Затем клетки осаждали центрифугированием при 1500 об / мин, комнатной температуре (RT) в течение 5 минут, ресуспендировали в 30 мл RPMI 1640 и инкубировали при комнатной температуре в колбе T150 для удаления остатков ткани.После 30–60 мин инкубации клетки осторожно промывали RPMI 1640, пропускали через другой фильтр для клеток 70 мкм в новую центрифужную пробирку на 50 мл и осаждали центрифугированием при 1500 об / мин при комнатной температуре в течение 5 минут. Осадок клеток ресуспендировали в 2–3 мл PBS + 5% инактивированного нагреванием FBS и добавляли в предварительно промытую колонку с волокнами из нейлоновой ваты (Polysciences). Колонку с клетками инкубировали при 37 ° C в течение 1 ч с последующими 2–3 промывками PBS + 5% FBS для удаления клеток, которые не были прикреплены к волокну нейлоновой ваты (включая Т-клетки).Клетки, прилипшие к нейлоновой вате, большинство из которых являются В-клетками, высвобождались путем погружения и собирались в центрифужную пробирку на 50 мл. После промывки PBS + 5% FBS и центрифугирования при 1200 об / мин в течение 10 минут клетки подсчитывали и ресуспендировали в соответствующем количестве замораживающей среды (RPMI-1640, содержащий 10% DMSO, 10% FBS, 1% пенициллин / стрептомицин и 1% пенициллин / стрептомицин). % глутамина) для криоконсервации.

Антитела

Моноклональные антитела (mAb): L243 (ref. ⁵⁹ ), Map.DM1 (ref. ⁶⁰ ), Mags.DO5 (ref. ¹⁹ ) и CerCLIP.1 (ref. ⁵⁷ ) были использованы для специфического окрашивания DR, DM, DO и MHCII-ассоциированного CLIP соответственно. Конъюгированные с флуорофором формы этих моноклональных антител, использованные в этом исследовании, включали конъюгированные с FITC L243 (BioLegend), конъюгированные с PE mAb против HLA-DR (BD Biosciences), конъюгированные с Alexa Fluor 568 L243, конъюгированные с Alexa Fluor 647 L243, APC / Cy7-конъюгированный L243 (BioLegend), Alexa Fluor 488-конъюгированная карта.DM1, PE-конъюгированная карта.DM1 (BD Biosciences), Alexa Fluor 647-конъюгированная карта.DM1, Alexa Fluor 700-сопряженная карта. DM1, Alexa Fluor 568-конъюгированные Mags.DO5, CF405S-конъюгированные CerCLIP.1, FITC-конъюгированные CerCLIP.1 (BD Biosciences), Alexa Fluor-568-конъюгированные CerCLIP.1 и Alexa Fluor 647-конъюгированные антитела против CD74 человека (CerCLIP.1, Novus Biology). Антитела, специфичные к эндосомным маркерам, использованные в исследованиях 3D-SIM, включали конъюгированные с Alexa Fluor 488 мышиные mAb против человеческого CD107a (LAMP1) (клон h5A3, Biolegend), мышиные mAb против человеческого EEA1, конъюгированные с Alexa Fluor 488 (клон 3C10, MBL). , Alexa Fluor 488-конъюгированные поликлональные кроличьи антитела против RAB7 человека (Bioss), поликлональные кроличьи антитела против EEA1 (Abcam), поликлональные кроличьи антитела против LAMP1 (Abcam), поликлональные кроличьи антитела против RAB7 человека (подарок от Dr.Suzanne Pfeffer, Департамент биохимии, Стэнфорд) и Alexa Fluor 488, конъюгированные с сильно перекрестно адсорбируемыми козьими антителами против кроличьих IgG (Thermo Fisher Scientific). Антитела, используемые для выделения и окрашивания субпопуляций В-клеток миндалин, включали конъюгированные с FITC антитела против CD3 человека (BD Biosciences), конъюгированные с FITC антитела против CD11c человека (клон Bu15, BioLegend), конъюгированные с FITC антитела против CD14 человека (клон M5E2, Biolegend), FITC-конъюгированные антитела против человеческого CD16 (клон 3G8, BioLegend), PerCP / Cy5.5-конъюгированные мышиные антитела против человеческого CD19 (клон h2B19, BioLegend), PE / Cy7-конъюгированные антитела против человеческого IgD (клон IA6–2 , BioLegend), конъюгированные с Pacific Blue антитела против человеческого IgD (клон IA6-2, BioLegend), конъюгированные с Alexa Fluor 700 против человеческого CD38 (клон HIT2, BioLegend), PE-конъюгированные антитела против человеческого CD69 (клон CH / 4, Thermo Fisher Scientific), мышиные антитела против CD69 человека, конъюгированные с PE / CF594 (клон FN50, BD Biosciences), конъюгированные с PE / Cy7 против CD86 человека (клон IT2.2, BioLegend), APC-конъюгированные антитела против CD86 человека (клон IT2.2, BioLenggend). Антитела, используемые в исследовании интернализации BCR-GAD65, включали конъюгированные с Alexa Fluor 488 козьи античеловеческие IgG (Thermo Fisher Scientific), моноклональные мышиные анти-GAD65 (Millipore Sigma), моноклональные мышиные анти-GAD2 (ImmunoGen) и Alexa Fluor. 488-конъюгированный с высокой степенью перекрестной адсорбции козий антимышиный IgG (H + L) (Thermo Fisher Scientific). CerCLIP.1, L243, Map.DM1 очищали от мышиного асцита с использованием шариков с протеином G (GE Healthcare), а затем метили соответствующим красителем Alexa Fluor, карбоновым эфиром, сукцинимидиловым эфиром (Thermo Fisher Scientific) с последующей эксклюзионной хроматографией с использованием геля Superdex 200. фильтрующая колонка (GE Healthcare) для удаления лишнего свободного красителя.

Клонирование единичных клеток и культивирование линий, производных от Т2

3 миллиона клеток T2DR4DMDO сначала были помечены фиксируемым красителем мертвых клеток LIVE / DEAD (Thermo Fisher Scientific) в фосфатно-солевом буфере (PBS) на льду в течение 30 минут, а затем промыты. и ресуспендирован в 0.3 мл PBS + 1% бычьего сывороточного альбумина (BSA) + 2 мМ этилендиаминтетрауксусной кислоты (EDTA) для поверхностного окрашивания DR4-ассоциированного CLIP. Клетки окрашивали FITC-CerCLIP.1 (разведение 1: 5) на льду в течение 30 минут и трижды промывали 0,5 мл PBS + 1% BSA + 2 мМ EDTA перед ресуспендированием в 0,5 мл PBS + 1% BSA + 2 мМ EDTA. для сортировки отдельных ячеек. Сортировку клеток, активируемых флуоресценцией отдельных клеток (FACS), выполняли с использованием BD FACSAria II (BD Biosciences) в Стэнфордском общем центре FACS. Каждую клетку (CLIP ^hi или CLIP ^lo ) сортировали в лунку, содержащую 100 мкл полного IMDM с GlutaMax, 10% FBS и 1% пенициллина / стрептомицина в 96-луночном круглодонном планшете.Еще 100 мкл полной среды IMDM GlutaMAX добавляли в каждую лунку 96-луночного планшета перед инкубацией планшета при 37 ° C. Верхние ~ 150 мкл среды осторожно заменяли свежей средой каждые 7 дней, пока на дне планшета не наблюдалось скопление клеток. Затем клетки переносили в более крупные лунки с плоским дном 48-луночного планшета с удвоенными или утроенными объемами свежей среды + 1 мг / мл G418 (Генетицин) + 1 мкг / мл пуромицина + 100 мкг / мл зеоцина (Thermo Fisher Scientific). для поддержания давления отбора для экспрессии DR4, DM и DO в отсортированных клонах T2DR4DMDO.При соответствующих условиях отбора многие одиночные клональные линии поддерживали постоянный уровень экспрессии общего белка DR4, DM или DO в течение нескольких недель последующего увеличения и культивирования. Мы также заметили, что уровни экспрессии этих белков могут снизиться, если реагент отбора был удален из культуры.

Выделение субпопуляций В-клеток миндалин

В-клетки миндалин человека размораживали на льду и дважды промывали PBS + 5% FBS. Большинство мертвых клеток и дебриса отделяли от живых В-клеток центрифугированием в градиенте плотности с использованием среды для разделения лимфоцитов (MP Biomedicals).В-клетки снова промывали, подсчитывали и ресуспендировали в PBS при плотности 10 × 10 ⁶ клеток / мл. Клетки окрашивали фиксируемым красителем мертвых клеток LIVE / DEAD в течение 30 мин. После окрашивания живых / мертвых клеток промывали PBS и ресуспендировали в RPMI без фенола (среда RPMI 1640, без глутамина, без фенолового красного, Thermo Fisher Scientific) с добавлением 3% FBS. Затем В-клетки окрашивали на льду смесью антител, включая: анти-CD3, анти-CD11c, анти-CD14, анти-CD16, анти-CD19, анти-CD38 и анти-IgD антитела.После 30-40 мин окрашивания поверхности клетки промывали RPMI, не содержащим фенолового красного, и пропускали через фильтр 70 мкм перед загрузкой в ​​сортировщик клеток. FACS выполняли с использованием FACSAria II в Стэнфордском совместном предприятии FACS с использованием сопла 70 мкМ. В-клетки (CD3-, CD14-, CD16-, CD11c-, CD19 +) были разделены на субпопуляции наивных (IgD +, CD38-), памяти (IgD-, CD38-) и GC (IgD-, CD38 +), как описано ранее ^18,19 . Отсортированные клетки, ресуспендированные в RPMI с добавлением 3% FBS, хранили на льду.Чистота отсортированных подмножеств В-клеток была подтверждена повторным нанесением образца на сортировщик клеток сразу после сортировки.

Активация субпопуляций В-клеток миндалин

Наивные, клетки памяти и GC B инкубировали при плотности 10 ⁶ клеток / мл с или без активационного коктейля в среде IMDM с добавлением 10% FBS, 1% пенициллина / стрептомицина и 1% глутамина при 37 ° C в течение различных периодов времени до анализа с помощью проточной цитометрии для определения уровней общего белка, с помощью iFACS для расчета DM _free / CLIP _freq или с помощью 3D-SIM для количественной оценки совместной локализации белков .Активационный коктейль содержал 20 нг / мл IL-4 (Peprotech), 20 нг / мл IL-2 (BioLegend), 200 нг / мл MEGACD40L (лиганд CD4 человека, Enzo Biochem Inc), 5 мкг / мл Goat Адсорбированный мышиный F (ab ‘) 2 против человеческого IgG-UNLB и 5 мкг / мл Goat F (ab’) 2 против человеческого IgM-UNLB (Southern Biotech).

Сшивание BCR на линиях клеток DP

Клетки DPA или DPD инкубировали при плотности 2 × 10 ⁶ клеток / мл с или без 5 мкг / мл козьего F (ab ‘) 2 против IgG человека в полная среда IMDM GlutaMAX с добавлением 10% FBS, 1% пенициллина / стрептомицина и 1% глутамина при 37 ° C в течение указанного периода времени.В другой момент времени (например, 0, 20 мин, 1 час и 2 часа) 0,2 миллиона клеток собирали центрифугированием при 400 xg, 4 ° C в течение 5 минут и инкубировали при плотности 10 × 10 ⁶ клеток. / мл с 10 мкг / мл конъюгированного с Alexa Fluor 488 козьего античеловеческого IgG в PBS + 1% BSA на льду в течение 30 мин для окрашивания поверхностного BCR. После двух промывок PBS + 1% BSA клетки анализировали на проточном цитометре FACSCalibur (BD Biosciences).

Стимуляция клеточных линий DP с помощью GAD65

Клетки DPA или DPD инкубировали при плотности 10 × 10 ⁶ клеток / мл с или без 2 мкг / мл GAD65 (Abcam) в PBS + 1% BSA на льду в течение 1 час, чтобы загрузить GAD65 в BCR, в то время как интернализация BCR ингибируется.Клетки, нагруженные или ненагруженные GAD65, промывали PBS + 1% BSA, осаждали центрифугированием при 400 мкг, 4 ° C в течение 5 мин, ресуспендировали при плотности 2 × 10 ⁶ клеток / мл в полной среде IMDM GlutaMAX содержащие 5 мкг / мл GAD65 или без антигена, а затем инкубировали при 37 ° C в течение указанного периода времени. Через 0, 20 мин, 1 час и 2 часа 0,6 миллиона клеток были собраны центрифугированием при 400 xg, 4 ° C в течение 5 минут и использованы в трех различных анализах: 1) 0,2 миллиона клеток были использованы для анализа iFACS (см. Ниже ).2) 0,2 миллиона клеток инкубировали при плотности 10 × 10 ⁶ клеток / мл с 10 мкг / мл козьего античеловеческого IgG, конъюгированного с Alexa Fluor 488, в PBS + 1% BSA на льду в течение 30 минут для окрашивания поверхностного BCR. . 3) 0,2 миллиона клеток инкубировали при плотности 10 × 10 ⁶ клеток / мл с 10 мкг / мл антитела против GAD65 на льду в течение 30 минут для окрашивания поверхности GAD65 с последующими двумя промываниями PBS + 1% BSA и вторичное окрашивание 10 мкг / мл конъюгированного с Alexa Fluor 488 козьего антимышиного IgG (H + L) в PBS + 1% BSA на льду в течение 30 мин.Меченые антителами клетки в 2) и 3) анализировали на проточном цитометре BD FACSCalibur.

Массовый анализ общих белков MHC с помощью проточной цитометрии

Клетки фиксировали / повышали проницаемость с использованием реагента Cytofix / Cytoperm (100 мкл на миллион клеток, BD Pharmingen) при комнатной температуре в течение 20 минут и дважды промывали 1x буфером Permwash (BD Pharmingen ) до мечения иммунофлуоресцентных антител. Промытые клетки осаждали центрифугированием при 400 × g, 4 ° C в течение 5 мин и ресуспендировали в 1x буфере Permwash, содержащем конъюгированные с флуорофором DR-, DM-DO- и CLIP-специфические антитела (~ 1 мкг каждого антитела на миллион клеток. на 100 мкл буфера) и инкубировали на льду в течение 1 ч.Меченые антителами клетки дважды промывали 1x буфером Permwash и затем ресуспендировали в PBS + 1% BSA для анализа на проточном цитометре, FACSCalibur или LSRII (BD Biosciences). Данные проточной цитометрии анализировали с использованием программного обеспечения FlowJo (Tree Star, Inc.).

Определение внутриклеточных уровней CLIP с помощью проточной цитометрии

Клетки сначала метили фиксируемым красителем мертвых клеток LIVE / DEAD в PBS на льду в течение 30 мин, а затем промывали PBS и окрашивали FITC-CerCLIP.1 (1: 5 разведение) в PBS + 1% BSA при плотности клеток 10 × 10 ⁶ клеток / мл на льду в течение 30 мин.После инкубации клетки дважды промывали PBS + 1% BSA и фиксировали / повышали проницаемость, как описано выше. Половину фиксированных / проницаемых клеток ресуспендировали в PBS + 1% BSA для проточного цитометрического анализа поверхностных уровней CLIP; другую половину ресуспендировали при плотности 10 × 10 ⁶ клеток / мл в 1x буфере Permwash, содержащем FITC-CerCLIP.1 (разведение 1: 5), и инкубировали на льду в течение 30 минут для окрашивания внутриклеточного CLIP. Вторую половину CLIP-меченых клеток дополнительно дважды промывали 1x буфером Permwash и затем ресуспендировали в PBS + 1% BSA для проточного цитометрического анализа общих уровней CLIP.Уровни внутриклеточного CLIP, которые связаны с MHCII, были рассчитаны как:

$$ {\ rm {MFI}} \, ({{\ rm {CLIP}}} _ {{\ rm {int}}}) = { \ rm {MFI}} \, ({{\ rm {CLIP}}} _ {{\ rm {tot}}}) — {\ rm {MFI}} \, ({{\ rm {CLIP}}} _ {{\ rm {srf}}}). $$

Индекс клеточной сортировки, активируемой флуоресценцией (iFACS)

Клетки сначала были помечены LIVE / DEAD фиксируемым водно-мертвым красителем в PBS на льду в течение 30 мин. а затем фиксировали / пермеабилизировали и метили конъюгированными с флуорофором DR-, DM-DO- и CLIP-специфическими антителами с использованием той же процедуры, что и при массовом анализе общих белков MHC.Сортировщик клеток BD FACSAria II использовали для сортировки отдельных клеток в 96-луночный планшет. Во время сортировки клеток функция индекса ⁶¹ была включена для записи интенсивности флуоресценции индекса (ИФ). Индексные FI включали FI в каждом канале обнаружения белка для индивидуально отсортированных одиночных клеток. iFACS проводился в Стэнфордском общем центре FACS. Данные индекса FI были экспортированы в Excel из программы BD FACSDIVA (BD Biosciences) и могут быть проанализированы отдельно от файлов стандарта проточной цитометрии (FCS).

Расчет DM

_free / CLIP _freq с использованием данных индекса FI

Удаление CLIP для пептидного обмена в B-клетках в значительной степени зависит от каталитической функции DM. Следовательно, относительное количество свободных молекул DM по отношению к MHCII-ассоциированному CLIP в каждой отдельной клетке является критическим параметром, который отражает эффективность удаления CLIP. Данные индекса FI, связанные с индивидуально отсортированными отдельными ячейками, позволяют вычислить такой параметр: DM _{бесплатно} / CLIP _freq .Чем выше число, тем эффективнее клетка может сканировать загруженный CLIP MHCII и катализировать высвобождение CLIP. В отличие от тесного взаимодействия DM / DO ^12,23,24 , DM только временно связывается с пептидно-рецептивной формой MHCII ^5,6,62 . Следовательно, молекулы DM, которые не связаны с DO, свободны от субстрата и способны получать доступ к загруженному CLIP MHCII и катализировать обмен пептидов. Используя данные индекса FI, полученные для отдельных ячеек, свободный DM можно рассчитать как:

$$ {{\ rm {DM}}} _ {{\ rm {free}}} = {{\ rm {DM}}} _ {{\ rm {tot}}} — {{\ rm {DM}}} _ {{\ rm {DO}} — {\ rm {associated}}} $$

, где от _до немецких марок на ячейку определяется индексом FI в канале обнаружения DM после нормализации для соты (деленной на FSC).Связанный с DO DM на ячейку оценивался индексом FI в канале обнаружения DO после нормализации для размера ячейки. Частоту загруженного CLIP MHCII среди всех молекул MHCII в одной и той же ячейке можно рассчитать как:

$$ {{\ rm {CLIP}}} _ {{\ rm {freq}}} = {{\ rm {CLIP }}} _ {{\ rm {tot}}} / {{\ rm {MHCII}}} _ {{\ rm {tot}}} $$

, где CLIP _до на ячейку определялся индексом FI на канал обнаружения CLIP после нормализации для размера ячейки. MHCII _— на ячейку оценивали по индексу FI в канале обнаружения DR после нормализации для размера ячейки.Примечательно, что сравнение DM _free / CLIP _freq было выполнено среди отдельных клеток от одного и того же индивидуума, уровни экспрессии DR которых наиболее вероятно пропорциональны их уровням экспрессии MHCII; Использование DR _tot (≈cMHC _tot , где c — константа) при вычислении CLIP _freq должно иметь минимальное влияние на эти сравнения. Примеры этих сравнений включали наивные миндалины и В-клетки памяти от одного и того же донора, а также линии DPA и моноклональные В-клетки DPD, выделенные от одного и того же пациента, у которого развился диабет 1 типа ⁵⁸ .Кроме того, поскольку индекс FI, представляющий уровни DM и DO, был измерен двумя независимыми каналами обнаружения в эксперименте iFACS, вполне вероятно, что (FI _DM / FSC — FI _DO / FSC) для определенных клеток приводит к отрицательному результату. ценить. Однако для относительных значений это не влияет на сравнение эффективности катализа удаления CLIP или пептидного обмена между двумя группами клеток. Например, по сравнению с отрицательным значением положительное значение означает относительно больше _{DM свободных} DM на ячейку.Однако, чтобы соответствовать физиологическому значению DM _{свободный} , все значения (DM _до — DM _{, связанный с DO} ) в эксперименте вычитались на минимальное значение (DM _до — DM _{DO- связанный} ) из ​​одного и того же эксперимента дважды (линейное преобразование данных), чтобы привести все значения к положительным, при этом минимальное значение теперь становится | DM _до — DM _{, связанное с DO} | _мин. .

Подготовка образцов для 3D-SIM

Клетки фиксировали / повышали проницаемость с использованием реагента Cytofix / Cytoperm (BD Pharmingen) при комнатной температуре в течение 20 минут (для клеточных линий) или на льду в течение 30 минут (для B-клеток миндалин) и дважды промывали с 1x буфером Permwash (BD Pharmingen).Для FACS-отсортированных В-клеток миндалин (до или после активации in vitro ) фиксированные / проницаемые клетки подвергались воздействию белого света высокой интенсивности от металлогалогенного источника света (MME-250, тип 250 Вт, TRI Vision, www. triv.co.kr) в течение 2 часов на льду для полного фотообесцвечивания остаточных флуорофоров (подтверждено проточной цитометрией и 3D-SIM). Затем фиксированные / проницаемые клетки окрашивали антителами, специфичными для эндосомального маркера, и отобранных белков в 1x буфере Permwash + 50 мМ глицина, используя тот же подход, который использовался выше для анализа проточной цитометрии.Избыток антител в окрашивающем растворе удаляли путем интенсивных промывок: 2–3 промывки с использованием 1x Permwash + 50 мМ глицина с последующими 2–3 промываниями с использованием PBS + 1% BSA + 50 мМ глицина. Глицин был добавлен для ингибирования неспецифического связывания. Красители Alex Fluor были использованы из-за их яркости и фотостабильности. Было минимальное различие при обнаружении эндосомальной локализации белков MHC путем прямого окрашивания (то есть с использованием красителя Alexa Fluor, непосредственно конъюгированного с LAMP1, EEA1 или RAB7) по сравнению с непрямым окрашиванием (т.е.(например, с использованием кроличьих антител против LAMP1, EEA1 или RAB7 с последующим применением конъюгированных с вторичным красителем Alexa Fluor антител против кроликов). В экспериментах, которые генерировали данные для количественной оценки совместной локализации поверхность-поверхность, было выбрано прямое окрашивание для минимизации отношения сигнал / шум. Alexa Fluor 488 использовался для эндосомных маркеров, Alexa Fluor 568 использовался для CLIP или DO, а Alexa Fluor 647 использовался для DR или DM. Меченые антителами клетки ресуспендировали в PBS + 1% BSA + 50 мМ глицина с плотностью 10 ⁶ клеток / мл и 100 мкл переносили в пустую одиночную цитофуннель Shandon с белыми фильтрующими картами (Thermo Scientific Fisher), которые были предварительно обработаны. — обрабатывали промыванием 1 мл PBS с последующим цитоспиннингом.Затем воронку с образцами клеток собирали с помощью высокоточного покровного стекла (24 × 50 мм, 170 ± 5 мкм, № 1.5 H, MARIENFELD) и предметного стекла из нержавеющей стали для цитологии Shandon (Thermo Scientific Fisher) для цитоспинации клеток на покровное стекло и образуют осадок однослойных клеток. Цитоспин выполняли на цитоцентрифуге в режиме медленного ускорения 500 об / мин в течение 5 мин. После разборки покровное стекло ненадолго сушили на воздухе, а место, где образовался осадок однослойных клеток, покрывали 14 мкл среды SlowFade Gold Antifade с DAPI (Thermo Fisher Scientific).Затем покровное стекло переворачивали и устанавливали поверх предварительно очищенного плоского микропрепарата Gold Seal (25 × 75 мм, Thermo Fisher Scientific) и края закрывали лаком для ногтей.

Сбор и реконструкция данных 3D-SIM

Applied Precision N = 1,514 на покровное стекло было нанесено иммерсионное масло (GE Healthcare). Микрослайд перевернули и поместили над линзой объектива (U-PLANAPO 100 ×, N.A. 1.40) на платформе микроскопа OMX V4 стороной с образцом и покровным стеклом вниз.Изображения получали в режиме SIM с использованием системы визуализации Applied Precision DeltaVision OMX (GE Healthcare) с четырьмя лазерами (100 мВт: 405 нм, 488 нм, 568 нм; 300 мВт, 642 нм MONET) и 3 камерами обнаружения emCCD. Длины волн для эмиссионных фильтров: 435/31 нм для DAPI или эквивалентного канала красителя, 528/48 нм для Alexa Fluor 488 или эквивалентного канала красителя, 609/37 нм для Alexa Fluor 568 или эквивалентного канала красителя и 683/40 нм для Alex Fluor 647 или эквивалентного канала красителя (обнаружение с помощью той же камеры, что и для канала DAPI).Отношение сигнал (максимум) к шуму (минимум) на каждом канале было оптимизировано (> 10 раз), мощность лазера (% T) была установлена ​​на ≤10%, а экспозиция ниже ≤80 мс, чтобы минимизировать фотообесцвечивание. Размер Т2 и В-клеток миндалин составляет ~ 5-10 мкм и ~ 2-5 мкм соответственно. Представляющее интерес микроскопическое поле XY размером 512 × 512 пикселей (0,08 мкм / пиксель) или, точнее, трехмерное пространство между покровным стеклом и микропрепаратом, содержащим образец однослойных клеток, сканировали по оси Z с шагом 0,125 мкм. ~ 50–80 сканированных оптических срезов трехмерного пространства, содержащего образец, дали стопку из ~ 50–80 2D XY изображений.Затем стопку изображений реконструировали в объемное трехмерное изображение с помощью программного обеспечения для обработки изображений softWoRx 7.0.0 (GE Healthcare). Реконструкция структурированного освещения (SI) OMX была выполнена с использованием специфической для канала оптической передаточной функции (OTF) с специфичными для канала фильтрами Винера: 0,0030 для канала DAPI, 0,0010 для канала Alexa Fluor 488, 0,0010 для канала Alexa Fluor 568 и 0,003 для канала Alex Fluor 647. Изображения OMX были скорректированы на хроматическую аберрацию и выровнены с использованием ящика источника изображения сине-зелено-красного (BGR).

Расчет совместной локализации поверхность-поверхность с использованием данных 3D-SIM

Трехмерное изображение, реконструированное SI, было просмотрено и проанализировано с помощью программного обеспечения для анализа изображений Imaris v9.4 (ImarisXT, Bitplane Inc, http://bitplane.com). Для каждого исходного канала была создана объемная поверхность, соединяющая вокселы (0,08 мкм x 0,08 мкм x 0,08 мкм), которые содержат сигналы флуоресценции, связанные с целевым белком, чтобы моделировать локализацию белка. Для минимизации шума алгоритм допускал сглаживание на 0.08 мкм «Уровень детализации площади поверхности» и вычитание фона на 0,16 мкм «Диаметр самой большой сферы, которая вписывается в объект». Фильтр, используемый для классификации поверхности, был «Число вокселей выше» 5. При наличии объемных поверхностей, доступных в двух исходных каналах, перекрывающаяся поверхность затем была рассчитана с использованием Xtension «совместная локализация поверхности и поверхности», основанного на METLAB алгоритма, построенного как патч расширения. для Имарис. Это Xtension создало новый канал для перекрывающейся поверхности, который включает вокселы, общие для двух поверхностей исходного канала.Объемное суммирование вокселей в пределах перекрывающейся поверхности, деленное на объемное суммирование вокселов в пределах одной поверхности в исходном канале, использовалось для оценки процента белка, представленного исходным каналом, который совмещен с другим белком.

Статистический анализ

Во всех статистических анализах этого исследования сравнивалась одна переменная между двумя группами образцов. Таким образом, двусторонний тест t был использован для определения статистической значимости разницы со значимостью, определяемой как P <0.05. t-критерий Велча использовался, если две группы выборок имели неравные дисперсии или разный размер выборки. T-критерий парных выборок использовался, если в двух группах были совпадающие пары образцов. Вся статистика проводилась с помощью GraphPad Prism с использованием встроенного анализа.

Зонная инженерия двумерных полупроводниковых материалов

О настройке и растянутой октаве яванских гамеланов в JSTOR

Абстрактный

Авторы подгоняют пять теоретических моделей к данным частотной шкалы (Гц), сообщенным Сурджодинингратом, Сударджаной и Сусанто на отдельных инструментах на основе их обширных измерений настроек 76 яванских гамеланов.Экспоненциальные модели подходят лучше всего и идеально в случае пентатонических шкал с почти равным интервалом (sléndro) или гептатонических шкал с неравными интервалами (pélog). Кроме того, по сравнению с (предполагаемым) умеренным растяжением западных чешуек, обе яванские шкалы значительно растянуты. Экспоненциальная модель может быть полезна при сравнении сильно изменяющихся настроек гамеланов, при изучении несуществующих или неполных ансамблей, для генерации переменных растяжений для использования в перцептивных и когнитивных исследованиях эстетики гамеланов или для компьютерного моделирования инструментов гамеланов.

Информация о журнале

Музыкальный журнал Леонардо (LMJ) — это ежегодный журнал, сопутствующий Леонардо. LMJ посвящен эстетическим и техническим вопросам современной музыки и звукового искусства. В каждом тематическом выпуске представлены художники и писатели со всего мира, представляющие широкий спектр стилистических точек зрения. Каждый том включает в себя последний компакт-диск или мультимедийный компакт-диск из серии компакт-дисков LMJ, увлекательную подборку произведений, выбранных приглашенным куратором и сопровождаемых заметками композиторов и исполнителей.

Информация об издателе

Одна из крупнейших университетских издательств в мире, MIT Press издает более 200 новых книг каждый год, а также 30 журналов по искусству и гуманитарным наукам, экономике, международным отношениям, истории, политологии, науке и технологиям, а также по другим дисциплинам. Мы были одними из первых университетских издательств, которые предлагали названия в электронном виде, и мы продолжаем внедрять технологии, которые позволяют нам лучше поддерживать научную миссию и широко распространять наш контент.Энтузиазм прессы к инновациям находит отражение в том, что мы постоянно исследуем этот рубеж. С конца 1960-х годов мы экспериментировали с поколениями электронных издательских инструментов. Благодаря нашей приверженности новым продуктам — будь то электронные журналы или совершенно новые формы коммуникации — мы продолжаем искать наиболее эффективные и действенные средства обслуживания наших читателей. Наши читатели привыкли ожидать превосходства наших продуктов, и они могут рассчитывать на то, что мы сохраним приверженность созданию строгих и инновационных информационных продуктов в любых формах, которые может принести будущее издательского дела.

Тест Ринне: влияет ли положение камертона на амплитуду звука в ухе? | Journal of Otolaryngology — Head & Neck Surgery

Результаты опроса по электронной почте показывают, что, несмотря на использование теста Ринне большинством респондентов-отоларингологов, используемые методы тестирования воздушной проводимости неоднородны. Исследование показывает, что большинство канадских отоларингологов предпочитают камертон 512 Гц, активируют вилку ударом колена и помещают вилку на расстоянии примерно 3–4 см от слухового прохода при проверке воздушной проводимости.Несмотря на традиционное учение о размещении зубцов камертона во время тестирования воздушной проводимости, результаты исследования показывают примерно одинаковое использование параллельного и перпендикулярного размещения камертона среди респондентов. Хотя некоторые из респондентов не понимали, что подразумевается под параллельным и перпендикулярным размещением вилки, эти результаты предполагают, что канадские отоларингологи различаются по ориентации зубцов камертона.

Результаты опроса следует интерпретировать с осторожностью.Лишь ограниченное количество врачей ответили на опрос (ответ 23%). Кроме того, дизайн вопроса допускал только ограниченное количество ответов. Следовательно, полная вариативность результатов тестирования воздушной проводимости канадскими отоларингологами, вероятно, не была отражена в исследовании. Несмотря на эти ограничения, обзор предоставил полезную информацию для разработки экспериментальной части исследования.

Насколько нам известно, звуковые спектры камертонов 512 и 256 Гц, активированных в клинической практике для целей теста Ринне, ранее не документировались.Спектры звука (рис. 4) и знание частот доминирующих гармоник важны для интерпретации результатов теста Ринне для пациентов с различными уровнями потери слуха по всему спектру частот.

Экспериментальные данные подтверждают традиционное учение о том, что параллельное размещение зубцов камертона относительно EAC дает более высокую амплитуду звука на уровне барабанной перепонки, чем перпендикулярное размещение зубцов. Для камертона 512 Гц разница между двумя положениями камертона составила 2.5 дБ для основной частоты. Это меньше, чем разница в 5 дБ, предсказанная математическими моделями [10]. Меньшая, чем ожидалось, разница может быть связана со сложным взаимодействием режимов вибрации камертона, не учитываемых математическими моделями. В качестве альтернативы, это меньшее различие можно объяснить присущей вариабельностью активации камертона при ударе по колену.

Измеренная разница амплитуд основной частоты 0,83 дБ между параллельным и перпендикулярным размещением камертона 256 Гц была меньше, чем 2.Разница в 5 дБ измерена для камертона 512 Гц. Хотя амплитуда при параллельном размещении камертона 256 Гц снова была больше, чем при перпендикулярном размещении, эта разница не достигла статистической значимости. Объяснение отсутствия статистической значимости, вероятно, кроется в разнице геометрии вилки 512 и 256 Гц. Из-за необходимости сохранить согласованность конструкции камертонов 512 и 256 Гц, камертон 256 Гц был больше, чем камертон 512 Гц (рис.1). Учитывая его большие размеры, разница в амплитуде между параллельным и перпендикулярным расположением камертона 256 Гц, вероятно, сводилась на нет из-за более широкого поля вибрации более крупных зубцов: при проверке параллельного положения камертона поместите край камертона. Вилка 256 Гц на расстоянии 30–49 см от EAC размещает центр камертона дальше от EAC по сравнению с тем же самым размещением меньшей вилки с частотой 512 Гц (рис. 5). Мы проверили это объяснение, выполнив отдельный эксперимент с другой конструкцией камертона 256 Гц, где размеры вилки 256 Гц были аналогичны вилке 512 Гц.В этом отдельном эксперименте, не представленном в этом отчете, была обнаружена статистически значимая разница в 3,7 дБ в пользу параллельного размещения камертона.

Рис. 5

Влияние размера камертона на расстояние от центра диполя камертона до слухового прохода. Параллельная ориентация производит более громкий звук, и когда это сочетается с размещением вибрирующего диполя ближе к ушному каналу в меньшем камертоне с частотой 512 Гц, эффект наиболее заметен

Восприятие громкости — сложное психоакустическое явление, на которое влияют не только амплитуда, но и частота звука, его спектральное распределение, его продолжительность и временная структура, а также его общая акустическая среда [12].Предполагая, что все другие переменные, влияющие на восприятие громкости, остаются постоянными, человек с нормальным слухом должен уметь различать разницу в амплитуде до 1,5 дБ [13, 14]. Разрешение по амплитуде 1,5 дБ сохраняется у слабослышащих пациентов с большинством типов кондуктивной и нейросенсорной тугоухости. Единственное очевидное исключение — более низкое разрешение по амплитуде, наблюдаемое у пациентов с акустической невромой (4,5 дБ) [13, 14]. Эти факты свидетельствуют о том, что разница амплитуд между параллельным и перпендикулярным расположением камертона EEC, наблюдаемая в этом исследовании, может быть воспринята большинством пациентов, проходящих тест Ринне.Таким образом, положение камертона по отношению к EAC во время теста Ринне представляет собой значительную переменную, которая потенциально может влиять на чувствительность и специфичность теста. Необходимы дальнейшие исследования, чтобы проверить, влияет ли положение камертона во время теста Ринне на его результаты у пациентов с потерей слуха.

Настройка электронных свойств дативной связи N-B с соответствующим взаимодействием O-B: индикатор локализуемости электронов на основе уточнения волновой функции рентгеновского излучения

.2016 4 августа; 17 (15): 2395-406.

DOI: 10.1002 / cphc.201600223.

Epub 2016 31 мая.

Принадлежности

Расширять

Принадлежности

• ¹ Кафедра теоретической и структурной химии, химический факультет, Лодзинский университет, Pomorska 163/165, 90-236, Лодзь, Польша[email protected].
• ² Institut für Experimentalphysik, Freie Universität Berlin, Arnimallee 14, 14195, Berlin, Germany.
• ³ Факультет химической технологии и инженерии, Технологический университет и естественные науки, Seminaryjna 3, 85-326, Быдгощ, Польша.
• ⁴ Химический факультет Опольского университета, улица Олеска 48, 45-052, Ополе, Польша.
• ⁵ Институт химической физики твердого тела им. Макса Планка, Nöthnitzer Str. 40, 01187, Дрезден, Германия.

Элемент в буфере обмена

Lilianna Chęcińska et al.

Chemphyschem.

2016 .

Показать детали

Показать варианты

Показать варианты

Формат

АннотацияPubMedPMID

. 2016 4 августа; 17 (15): 2395-406.

DOI: 10.1002 / cphc.201600223.

Epub 2016 31 мая.

Принадлежности

• ¹ Кафедра теоретической и структурной химии, химический факультет, Лодзинский университет, Pomorska 163/165, 90-236, Лодзь, Польша. [email protected].
• ² Institut für Experimentalphysik, Freie Universität Berlin, Arnimallee 14, 14195, Berlin, Germany.
• ³ Факультет химической технологии и инженерии, Технологический университет и естественные науки, Seminaryjna 3, 85-326, Быдгощ, Польша.
• ⁴ Химический факультет Опольского университета, улица Олеска 48, 45-052, Ополе, Польша.
• ⁵ Институт химической физики твердого тела им. Макса Планка, Nöthnitzer Str. 40, 01187, Дрезден, Германия.

Элемент в буфере обмена

Полнотекстовые ссылки
Опции CiteDisplay

Показать варианты

Формат
АннотацияPubMedPMID

Абстрактный

Несмотря на огромный рост интереса к дифторборатным красителям, природа взаимодействий атома бора внутри ядра N-BF2-O еще полностью не изучена.Здесь набор индикаторов связывания в реальном пространстве используется для количественной оценки электронных характеристик дательной связи N-B в производных дифторбората. Схема разделения атомов в молекулах (AIM) дополняется подходом индикатора локализуемости электронов (ELI-D), и оба они были применены к экспериментальному и теоретическому распределению электронной плотности (подгонка волновой функции с ограничением рентгеновского излучения по сравнению с расчетами DFT). Кроме того, орбитальный анализ Ферми был представлен для небольших моделей DFT, чтобы поддержать и расширить результаты для структур, содержащих BF2.

Ключевые слова:

Ферми-орбитали; бор; химическая связь; дативные облигации; квантовая химия.

© 2016 WILEY-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, Вайнхайм.

Похожие статьи

• Перенос заряда через дативную связь N-B и дигидрогенные контакты.Экспериментальные и теоретические исследования электронной плотности малых кислотно-основных аддуктов Льюиса.

  Мебс С., Грабовски С., Фёрстер Д., Кикбуш Р., Хартл М., Даемен Л.Л., Моргенрот В., Люгер П., Паулюс Б., Ленц Д.
  Мебс С. и др.
  J. Phys Chem A. 23 сентября 2010; 114 (37): 10185-96. DOI: 10.1021 / jp100995n.
  J. Phys Chem A. 2010.

  PMID: 20726618

• Перенос заряда через дативную связь N-B и дигидрогенные контакты.Экспериментальные и теоретические исследования электронной плотности четырех дельтаэдрических боранов.

  Мебс С., Калиновски Р., Грабовски С., Фёрстер Д., Кикбуш Р., Юстус Е., Моргенрот В., Паульманн К., Люгер П., Габель Д., Ленц Д.
  Мебс С. и др.
  J Phys Chem A. 3 марта 2011; 115 (8): 1385-95. DOI: 10.1021 / jp109576a. Epub 2011 9 февраля.
  J. Phys Chem A. 2011.

  PMID: 21306162

• Индикаторы химической связи в реальном пространстве.Экспериментальные и теоретические исследования электронной плотности четырех дельтаэдрических боранов.

  Мебс С., Калиновски Р., Грабовски С., Фёрстер Д., Кикбуш Р., Юстус Е., Моргенрот В., Паульманн К., Люгер П., Габель Д., Ленц Д.
  Мебс С. и др.
  Inorg Chem. 2011, 3 января; 50 (1): 90-103. DOI: 10.1021 / ic1013158. Epub 2010 29 ноября.
  Inorg Chem. 2011 г.

  PMID: 21114266

• Обнаружена тактичность: индикаторы связи в реальном пространстве для химии цинкоцена.

  Мебс С., Чиллек М.А., Грабовски С., Браун Т.
  Мебс С. и др.
  Химия. 2012 10 сентября; 18 (37): 11647-61. DOI: 10.1002 / chem.201200870. Epub 2012 14 августа.
  Химия. 2012 г.

  PMID: 228

• Разнообразие методов анализа облигаций, один ответ? Исследование элементно-кислородной связи гидроксидов H _n XOH.

  Фугель М., Бекманн Дж., Джаятилака Д., Гиббс Г.В., Грабовски С.Fugel M, et al.
  Химия. 2018 20 апреля; 24 (23): 6248-6261. DOI: 10.1002 / chem.201800453. Epub 2018 6 апр.
  Химия. 2018.

  PMID: 29465756

Процитировано

1
артикул

• DORI обнаруживает влияние нековалентных взаимодействий на структуры ковалентных связей в молекулярных кристаллах под давлением.

  Мейер Б., Бартель С., Мейс А, Ванней Л., Гийо Б., Смит Б., Корминбёф К.
  Мейер Б. и др.
  J. Phys Chem Lett. 2019 4 апреля; 10 (7): 1482-1488. DOI: 10.1021 / acs.jpclett.9b00220. Epub 2019 18 марта.
  J. Phys Chem Lett. 2019.

  PMID: 30865472
  Бесплатная статья PMC.

LinkOut — дополнительные ресурсы

• Источники полных текстов

• Другие источники литературы

Полнотекстовые ссылки
[Икс]

Wiley

[Икс]

цитировать

Копировать

Формат:

AMA

APA

ГНД

NLM

.